PRMT2基因的miRNA载体构建及其活性鉴定

【摘要】目的：构建人蛋白质精氨酸甲基转移酶2（proteinargininemethyltransferase2,PRMT2）基因的miRNA真核表达载体，利用microRNA靶向PRMT2基因，鉴定其转染乳腺癌细胞株MCF7后的生物活性。方法：根据PRMT2基因序列设计合成4对pre-miRNA片段，定向克隆到pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR真核表达载体上，采用菌落PCR和测序分析鉴定插入序列的完整性；并将重组载体转染至MCF7细胞株中，采用Westernblot方法鉴定重组载体转染MCF7细胞后对PRMT2蛋白表达的干扰效果，以及萤火虫荧光素酶双报告基因系统检测PRMT2及其重组体对ERα转录活性影响。结果：1．构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确，间接免疫荧光法和westernblot法检测表明：重组体稳定转染MCF7细胞后可成功干扰PRMT2基因的表达。2．重组体转染组miPRMT2-1，miPRMT2-2，miPRMT2-3，miPRMT2-4四个重组体转染组的蛋白表达水平中，miPRMT2-3重组转染体蛋白表达减低最明显。3.与未转染组及control-miRNA组相比,稳定转染miPRMT2的MCF7细胞对雌激素的敏感性明显下降。4.PRMT2及其重组体对ERE-LUC转录活性的抑制是雌激素依赖的。在无E2刺激的条件下，PRMT2及其重组体对ERE-LUC转录活性无明显影响。结论：1．成功构建了靶向PRMT2基因的microRNA真核表达载体，而且重组体能够抑制PRMT2蛋白表达。2．靶向PRMT2基因的microRNA重组体可以抑制ERα介导的ERE-LUC的转录活性。
【作者】唐焱；
【导师】姜浩；
【作者基本信息】南华大学，肿瘤学，2012，硕士
【关键词】乳腺癌；微小RNA类；蛋白质精氨酸甲基转移酶2；

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